Speirs-Levy Zählkammer für Eosinophilie, 1 Stück

Verfahren zur Zählung Eosinophilen Zellen:

Material:

1. Mikroskop mit Objekttisch, vorzugsweise ein Binokular mit 15x Weitwinkel oder ein 16mm Okular
2. Mikroskopleuchte mit einem Gelbfilter (Wratton G#15)
3. Blutmischpipetten mit Plastik-Mundstück
4. Staubfreie Reinigungstücher
5. Punktionsnadel
6. Verdünnungsflüssigkeit
7. Zählkammer mit Deckglas

Arbeitsschritte

1. Blutgewinnung (drop puncture Methode): reinigen und trocknen der zu punktierenden Haut (Finger oder Ohr). Haut punktieren und mit einem weichem Reinigungstuch den ersten Tropfen wegwischen, danach mit einer Pipette 0,5 µl Blut aufnehmen.
2. Blut verdünnen: Sofort nach der Aufnahme des Blutes die Piptte in die Verdünnungslösung halten und in den Fingerspitzen drehen, während man die Pipette bis zur Skalierung auffüllt. 
3. Blut und Verdünnung vermischen:  Pipette zwischen Zeigefinger und Daumen für 10 Sekunden drehen, beide Enden der Pipette verschließen um ein Auslaufen zu vermeiden.
4. Befüllen der Zählkammer: Nach dem vermischen der Suspenion, die ersten 3 Tropfen verwerfen, die Zählkammer befüllen und das Deckglas auflegen.Die Fließgeschwindigkeit der Suspension kann mittels Zeigefinger am Ende der Pipette reguliert werden. 
5. Zellzahl bestimmen: Kammer 3 Min. ruhen lassen um eine vollständige Lyse der Zellen zu gewährleisten.

Zum optimalen zählen der Zellen empfiehlt es sich ein 150x Vergrößerung mit einem Sichtfeld von 1mm² zu benutzen. Die Eosinophilen Zellen haben eine ausgeprägte Zellwand. Die weißen Blutkörperchen sind blass mit einer faltigen Zellwand, die roten Blutkörperchen sollten vollständig verschwunden sein. 

Verfahren zur Zellzählung

Jede Zälkammer besteht aus 10x1mm² Bereichen unterteilt in 16 Kleinquadraten (Diagramm A)

Diagramm A

Durch das Miksoskop erkennt man in der linken oberen Ecke einen Startpunkt. Von dort aus zählt man nach rechts, am Ende beginnt man eine Linie weiter unten und zählt von rechts nach links. (Schlangenlinien, Diagramm B).

Diagramm B

Beginnend im linken oberen Bereich, die 4 ersten Qaudrate sind unterm Mikroskop zentriert. Alle Eosinophilen Zellen in diesem Bereich (auch die angrenzenden Zellen) werden gezählt. Anschlißend werden die nächsten 4 Bereiche in gleicher Weise gezählt. (Diagramm C).

Diagramm C

Reinigung:
Nach der Zellzählung wird das Deckglas entfernt und die Kammer mit einem weichem Reinigungstuch oder milder Reinigungslösung gereinigt. Zum Trocknen empfiehlt es sich die Kammer mit Aceton zu befeuchten und sie dann Schlierenfrei trocknen zu lassen.